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Type: Dissertação
Title: Análise proteômica comparativa de plasma humano de pacientes com e sem câncer de laringe
Análise proteômica comparativa de plasma humano de pacientes com e sem câncer de laringe
Author(s): Gomes, Clarissa Pedrosa da Costa 
First Advisor: Franco, Octavio Luiz
???metadata.dc.contributor.referee1???: Pereira, Rinaldo Wellerson
Summary: O câncer de laringe é uma doença significativa em todo o mundo, cuja incidência continua aumentando, especialmente devido ao elevado consumo de tabaco e álcool, mostrando um claro efeito sinergístico. O diagnóstico desta doença costuma ser feito em estádios avançados, sendo associado a baixas taxas de sobrevivência. Portanto, tem sido crucial a busca por métodos moleculares de detecção em estádios iniciais da doença. Este trabalho teve três objetivos principais: comparar plasmas sanguíneos de fumantes saudáveis e com câncer de laringe por meio de eletroforese bidimensional para buscar biomarcadores, definir técnicas de separação protéica de plasma humano sem utilizar gel de poliacrilamida e verificar a diferença de concentração de elementos-traço em proteínas específicas de pacientes com e sem câncer. Perfis de géis bidimensionais foram obtidos e comparados usando o software BioNumerics. Em todos os perfis, foram observados mais de 50 spots proteicos entre pH 4-10 e massa molecular de 10-60 kDa. Poucas diferenças foram encontradas entre os pacientes com câncer e os fumantes saudáveis. No entanto, o aparecimento de três spots entre pI 7.2 and 7.6 e massas moleculares de 20.3, 42.5 e 44.8 kDa apenas em géis de pacientes com câncer de laringe sugere a expressão de proteínas que podem ser tanto uma resposta do organismo causada pelo câncer quanto expressas por este a fim de ajudar no desenvolvimento da doença. Estas foram identificadas por espectrometria de massa como componentes do sistema imune, reforçando a importância da resposta imune como alvo para compreensão e tratamento do câncer de laringe. O teste de novas metodologias livres de géis de poliacrilamida foram feitos combinando a focalização isoelétrica líquida e a cromatografia líquida de alta pressão. Estas mostraram capacidade de fracionar proteínas com padrão semelhante à separação já estabelecida em géis. Finalmente, foi detectada a presença de elementos-traço por espectrometria de massa com fonte de plasma induzido em proteínas isoladas pela primeira técnica utilizada de plasmas de pacientes com e sem câncer de laringe. Dois elementos traço, Pb e Cr, conhecidos por serem carcinogênicos e que se encontram no tabaco foram observados em todas as proteínas analisadas. Uma vez que há vários estudos indicando o papel de elementos-traço em processos biológicos, é possível inferir que estes tenham efeito direto ou indireto no processo de carcinogênese, podendo ser crucial para o desenvolvimento desta doença.
Abstract: Laryngeal cancer is a significant disease worldwide which incidence remains increasing, especially due to elevated tobacco and alcohol consumption, which have a synergistic effect. Diagnosis is usually done at advanced-stages, which is associated with poorer survival rates. Therefore, the search for a screening method has been crucial. This work had three main objectives: to compare plasmas of healthy smokers and patients with laryngeal cancer by two dimensional electrophoresis in order to search for biomarkers, to define plasma protein separation techniques without using polyacrylamide gels, and to determine the concentration of trace elements in specific proteins of patients with and without laryngeal cancer. Two dimensional gel profiles were obtained and compared against each other using the BioNumerics software. In all profiles, over 50 protein spots were observed around pH 4-10 from molecular weight of 10-60 kDa. Few differences were found among the cancer and control patients. However, the appearance of three spots gathered between pI 7.2 and 7.6 and molecular weights of 20.3, 42.5 and 44.8 kDa in gels only from patients with cancer suggests the expression of proteins either caused by the cancer or maybe that aids in the disease development. These were identified by mass spectrometry as immune system components, reinforcing the importance of the immune response as target in the understanding and treatment of laryngeal cancer. Experiments to test the methods free from polyacrylamide gels were done by combining liquid isoelectric focusing and high performance liquid chromatography. These showed the ability to fractionate proteins with the same pattern as two dimensional electrophoresis. Finally, the presence of trace elements in specific proteins of patients with and without cancer separated by the first technique used was determined by inductively coupled plasma mass spectrometry. Two elements, Pb and Cr, known to be carcinogenic and present in tobacco were observed in all ten proteins analyzed. Once there are many studies indicating the role of trace elements in biological processes, it is possible to infer that these have direct or indirect effect in the carcinogenesis progress, and might be crucial to the development of this disease.
Keywords: câncer de laringe
proteômica
sistema imune
plasma
2D-PAGE
laryngeal cancer
proteomics
2D PAGE
immune system
human plasma
fumantes - câncer
CNPq: CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::CLINICA MEDICA::CANCEROLOGIA
Language: por
Parents: BR
Publisher: Universidade Católica de Brasília
Institution Abbreviation: UCB
Department: Ciências Genômicas, Genética Molecular e de Populações, Biotecnologia Molecular
Program: Programa de Pós-Graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia
Citation: GOMES, Clarissa Pedrosa da Costa. Análise proteômica comparativa de plasma humano de pacientes com e sem câncer de laringe. 2009. 29 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Genômicas, Genética Molecular e de Populações, Biotecnologia Molecular) - Universidade Católica de Brasília, Brasília, 2009.
Access Type: Acesso Aberto
URI:  https://bdtd.ucb.br:8443/jspui/handle/123456789/152
Document date: 24-Mar-2009
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia

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